目前最全氨基酸HPLC分析方法總結

氨基酸作為構成多肽和蛋白的基本單元，是非常重要的一類化合物。
隨著生物藥的逐漸興起，作為原料的氨基酸的質量分析的需求也越來越大。
大部分氨基酸由于至少同時含有大極性的氨基和羧基，因此整體極性很大，常用的C18柱+反相流動相對其保留很弱，同時部分氨基酸由于紫外吸收很弱，因此讓流動相和檢測器的選擇更有挑戰(zhàn)。

本文系統(tǒng)總結廣州菲羅門積累經典色譜應用，包括氨基酸衍生化分析、非衍生氨基酸直接分析、保護型氨基酸的手性分析以及非保護型氨基酸直接手性分析四種廣受關注的應用。

一、氨基酸衍生化分析
氨基酸衍生的方法比較多，最常用的是AQC衍生和PITC衍生。
雖然過程相對繁瑣，但是通過衍生后，一舉解決了氨基酸分析的兩個難點：
保留和紫外吸收。
通過衍生反應在氨基酸上接上疏水且有紫外吸收的基團，可以實現(xiàn)在C18柱+反相流動相的體系下進行HPLC分析。

AQC衍生法：

 

 

 

 PITC衍生法：

 

二、非衍生氨基酸直接分析

當選擇氨基酸非衍生直接分析時，對于有些疏水性比較好的氨基酸，可以直接用C18類柱子分析，比如：

 

可以選用帶有HILIC作用的色譜柱實現(xiàn)保留，當使用磷酸鹽類時，可以在截止波長條件下用UV檢測，比較經典的應用是用ACE HILIC-B檢測門鳥氨酸：

 

菲羅門也推出Comix系列智能神柱，可以在以ELSD、 CAD或者MS為檢測器的條件下分析氨基酸。

 

  

三、保護型氨基酸手性分析

當氨基酸上的氨基和羧基用Boc和/或FMOC等保護起來時，可以用正相或者反相的多糖類手性柱實現(xiàn)非常好的分離，有現(xiàn)成的分析方法，可以極大地減少方法開發(fā)的時間。

 

四、非保護氨基酸直接手性分析

對于非保護的氨基酸，菲羅門推出AAOA分析柱，即通過鍵合D-青霉胺于十八烷基柱上而成的配體交換型手性柱。該手性柱手性柱可以用于拆分α-型有機酸、α-型非衍生氨基酸及其衍生物、二元胺、二肽、內酰胺和氨基醇等。

到目前為止，我們已經實現(xiàn)了有機酸如D, L-乳酸、D, L-酒石酸的拆分，也實現(xiàn)了氨基酸如D, L-丙氨酸，D, L-天門冬氨酸，D, L-纈氨酸，D, L-脯氨酸：

 

總結: 本文全面總結了氨基酸類的HPLC分析方法，包括氨基酸衍生化分析、非衍生氨基酸直接分析、保護型氨基酸的手性分析以及非保護型氨基酸直接手性分析。

對于具體氨基酸的分析如有疑問，可以電話020-22826668找到您專屬的技術工程師。